3-磷酸甘油酸、琥珀酸苹果酸、富马酸、柠檬酸和α-酮戊二酸。”

“方法那就更加简单了。”

“首先，动物实验及样本收集36只ICR小鼠，体质量g，雌雄各半，按体质量随机分为6组，每组6只。

也就是对照组、模型组、拜阿司匹林组、蒲地蓝消炎口服液低剂量组、蒲地蓝消炎口服液中剂量组、蒲地蓝消炎口服液高剂量组。

拜阿司匹林组和蒲地蓝消炎口服液各剂量组给予相应剂量药物，每日1次，连续5d，空白组和模型组灌胃等体积的生理盐水。

末次给药1小时后，除空白组外，其余各组构建急性肺炎模型。

即使用异氟烷麻醉小鼠后，用脂多糖给小鼠滴鼻造模，空白组滴入相同体积生理盐水，造模12小时后进行取材。

各组小鼠摘眼球取血，解剖并取左肺中叶用百分之10甲醛溶液固定，石蜡包埋后进行小时E染色，分装部分血清用于检测IL-10、TNF-α和NF-κB的含量，剩余血清置于-80摄氏度保存，进行后续代谢组学检测。”

钟医喘了一口气，继续说道。

“其次，是溶液的配制。

精密称取丙酮酸、乳酸、琥珀酸、富马酸、苹果酸、α-酮戊二酸、磷酸烯醇式丙酮酸、顺式乌头酸、3-磷酸甘油酸、柠檬酸、异柠檬酸和葡萄糖对照品，溶解成1毫克/毫升的对照品储备液。

精密量取上述对照品储备液分别稀释成4、120、16、0.1、0.5、1、0.02、0.01、0.04、2.5、0.16、240微克/毫升的对照品溶液，4摄氏度保存。

精密称取1，肉豆蔻酸适量置于10毫升容量瓶中，加甲醇稀释溶解，配制成1毫克/毫升的内标储备液，4摄氏度保存。

吸取内标储备液适量，加入甲醇稀释成浓度为5微克/毫升的内标工作液。

然后是样本前处理及衍生化反应。

取50微升血清，加入200微升预冷的含1，2-13C2-肉豆蔻酸的甲醇溶液，涡旋3分钟，4摄氏度离心10分钟。

同时，取上清液100微升置30摄氏度真空浓缩仪挥干2小时，加10毫克/毫升甲氧胺吡啶30微升，涡旋5分钟，30摄氏度振荡1.5小时。

继续加入30微升BSTFA，涡旋5分钟，37摄氏度振荡半小时，最后将样品4摄氏度离心10分钟，14000r/分钟，取上清进样。

最后，分析条件色谱条件:载气为氦气，流速1.2毫升/分钟，采用分流进样，分流流速为24.0毫升/分钟，分流比为20∶1。

色谱柱:TG-5MS30m×0.25mm×0.25μm，进样口温度300摄氏度。

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